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Dysenterie a shigella et escherichia coli enteroinvasifs. Diagnostic par hybridation adn/adn.
La dyssententerie bacillaire ou shigellose est une maladie epidémique dans le monde entier, mais pose un problème tout particulier dans les régions intertropicale et les pays en voie de dveveloppememt ou sheigella flexnerir l’espèce prèvalente et S. dysenterise est responsable d’épidemies meurtrières. D’autres espèces peuvent etre isolées telles S. sonnei et S. boydii ainsi que certaines souches d’E. coli très proches des shigella appelées E. coli entéroivansifs ou ECEI.
La principale étape dans la physiopathologie de la shigella est la capacité qu’on ces bactéries de penetrer dans les cellules de l’épithélium colique,de s’y multiplier et de finalement tuer. Ce phenotype invasif donne lieu a des lésions intestinales faites l’abcès et d’ulcérations qui sont responsables des symptomes observer au cours de la dysenterie.
Cette étape critique du pouvoir pathogène des Dhigella et des ECEI est sous le controle d’un plasmide de 220 kbases (kb). Tous ces plasmides partagent un très haut niveau d’homologie et les séquences plus particulièrement impliquées dans l’invansivité apparaissent hautement conservées (4, 7, 8, 9 ,10, 13 )
Il devient donc possible d’exploiter l’homologie de ces séquences conservées pour tout détecter des shigelles et des ECEI par hybridation ADN/ADN à l’aide d’une sonde nucléique spécifique. Ce travail a reposé sur l’utilisation d’une sonde ADN de 17 kb. L’hybridation a été éffectuée sur des colonies bactériennes isolées et des selles dysentériques.
La sonde a été choisie sur la base d’études des séquences plasmidiques impliquées dans l’invasivité d’une souche de S. flexneri du sérotype 5 appelée M90T. Des études préalables utilisant la mutagènèse à l’aide du transposon Tn5 avaient montré que les insertions de ce transposon inactivant la pénétration pouvaient etre cartographieées au sein de trois fragments EcoR1 quasi contigus d’un poids moléculaire respectif de 7,5,11,5, et 17 kb. Le frqgment de 17 kb avait été reconnu comme le plus sensible dans la détection des quatre espèces de Shigella et les souches d’ECEI par hybridation sur des colonies isolées(8). Le travail a donc consisté à l’évaluation de l’éfficacité de cette sonde ADN de 17 kbases en région d’endémie Madagascar.